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Los controles de PCR de Vircell han sido diseñados para ser utilizados como controles positivos en técnicas de PCR convencionales o a tiempo real (Real time PCR). También pueden ser utilizados para controlar el proceso de extracción. Para ello, es necesario añadir previamente 1 µl del control de PCR a una muestra negativa

Los controles de PCR de Vircell contienen el ADN o ARN completo purificado del microorganismo especificado. De esta manera, cualquier pareja de cebadores específicos para el microorganismo puede usarse para la amplificación del agente infeccioso. Sólo en el caso de tres productos (MERS CORONAVIRUS, PARVOVIRUS B19 y SARS CORONAVIRUS) no se incluye el ADN completo del microorganismo. Estos controles de virus son plásmidos de un gen específico del microorganismo y en el nombre del producto viene especificado su carácter de plásmido ADN.

Nuestros controles de PCR se suministran liofilizados. Es necesario reconstituir los controles con agua bidestilada estéril. En el caso de los controles de ADN el volumen necesario es 100 µl, mientras que para los controles ARN es de 50 µl.

La caducidad de los controles de PCR de Vircell es de 30 meses para el ADN y 24 meses para el ARN desde la fecha de fabricación; siempre y cuando se observen las recomendaciones de almacenamiento descritas en las instrucciones de uso del producto.

Sí, los controles de PCR de Vircell se pueden utilizar en cualquier plataforma. Se ha comprobado que las prestaciones de nuestros controles se mantienen independientemente del tipo de plataforma en la que se practique la técnica.

No, no se requiere extracción previa puesto que nuestros controles contienen el ADN o ARN completo purificado del agente a analizar. Sin embargo, tal y como se menciona en la respuesta a la primera pregunta, nuestros controles podrían utilizarse también para verificar el proceso de extracción añadiendo 1 µl del control de PCR a una muestra negativa

Los controles de PCR se suministran liofilizados y, en estas condiciones, deben almacenarse refrigerados (2-8ºC). Una vez reconstituidos, los controles de ADN deben almacenarse a temperaturas entre -5 y -40ºC, mientras que el ARN requiere temperaturas entre -70 y -90ºC. Vircell recomienda hacer partes alícuotas del material tras reconstituir para evitar posibles problemas de congelación/descongelación asociados con la reutilización de un mismo vial en múltiples ocasiones. La respuesta de los controles a ciclos repetidos de congelación/descongelación ha sido analiza, y ambos DNA y RNA permanecen estables. Sin embargo, recomendamos a los usuarios evitar el uso de ciclos innecesarios de congelación y descongelación con el objetivo de evitar una posible degradación o contaminación de los controles.

Esto no supone un problema. Tras reconstituir el producto siguiendo las instrucciones de uso del producto, es posible realizar una dilución del mismo hasta obtener la concentración de mejor se adapte a sus requerimientos. Sin embargo, se debe tener cuidado, sobre todo con los controles cuantificados, de no almacenar alícuotas muy diluidas (< 1000 copias/µl) ya que una concentración reducida es menos estable al almacenamiento prolongado y a ciclos de congelación/descongelación, pudiendo alterarse las características del producto.
Vircell ya ha cuantificado la mayor parte de sus controles con el objetivo de hacerlos específicamente adecuados para PCR cuantitativa. La información actualizada a este respecto se indica en el listado de productos del catálogo Web. No dude en contactar con nosotros si tiene alguna duda sobre la cuantificación de los controles de PCR.

La cuantificación de nuestros controles se ha llevado a cabo por PCR a tiempo real (Real time- PCR). El número de copias se ha obtenido usando una secuencia específica del microorganismo como diana. En la cuantificación por PCR a tiempo real se utiliza una curva estándar como referencia comparando la amplificación de una secuencia diana del microorganismo con un estándar específico para cada uno de las referencias cuantificadas. 

Como se detalla en las instrucciones de uso del producto, es recomendable almacenar partes alícuotas de los controles para evitar innecesarios ciclos de congelación/descongelación. En el caso de requerir una concentración menor del control, es posible realizar diluciones de los controles y almacenarlas durante un corto periodo de tiempo, si bien nuestra recomendación es nunca almacenar diluciones con una concentración inferior a 1000 copias/µl ya que tras un periodo de almacenamiento prolongado o tras sucesivos ciclos de congelación/descongelación se ha observado reducción en el número de copias. En el caso de requerir una concentración menor a la establecida en el manual del control, las diluciones necesarias deberán prepararse justo antes de su uso.

No es recomendable congelar y descongelar los controles de PCR repetidas veces puesto que la calidad del producto puede verse afectada, sobre todo cuando el material genético no esta muy concentrado (<1000 copias/µl). La influencia de la congelación y la descongelación en la calidad del producto dependerá del tipo de control, siendo el ARN más fácilmente degradable que el ADN. En cualquier caso, resulta difícil fijar un número máximo de congelaciones/descongelaciones que nos garantice la calidad del proceso. Por ello, es más conveniente reconstituir el vial cuando se recibe y preparar alícuotas antes de la congelación.

Nuestros controles de PCR no son infecciosos porque solamente contienen material genético purificado extraido de microorganismos previamente inactivados. Vircell proporciona la documentación que certifica esta cuestión a requerimiento de sus clientes.

Vircell recomienda usar al menos 1 µl de control de PCR la primera vez que éste es utilizado En los controles cuantificados 1 µl de volumen contiene aproximadamente 12.500 copias del microorganismo, lo que permite realizar hasta 100 reacciones con cada vial. Sin embargo, el usuario puede preparar diluciones del control y determinar así cuántas copias necesita para conseguir un control positivo seguro en su sistema de PCR. Es importante tener en cuenta que no es aconsejable la utilización de los controles en el límite de detección (de 4 a 10 copias/ control).

Los controles de PCR de Vircell ofrecen importantes ventajas con respecto a otros fabricantes: • Amplia gama de productos que incluye más de 120 agentes infecciosos • Controles positivos indicados para su uso en PCR convencional y a tiempo real (Real Time PCR) • Línea de productos versátil- válidos como control de amplificación y extracción • La mayor parte de los controles son cuantificados • Contienen el ADN o ARN completo y purificado- cualquier secuencia puede ser amplificada • Los controles obtenidos a partir de microorganismos completos • Pueden ser utilizados en cualquier plataforma • Diseñados para evitar los factores de variabilidad en los tests de PCR • Su presentación liofilizada evita elevados costes de transporte y mejora la estabilidad • No necesitan hielo seco para su transporte • Precios competitivos para uso en diagnóstico clínico

Todos nuestros controles de PCR, con la excepción de las referencias de Chamidia, Citomegalovirus y Toxoplasma, tienen marca CE. Los productos que aún no están marcados están sujetos a un proceso más complejo que requiere algo más de tiempo. No dude en contactar con nosotros para obtener información actualizada a este respecto.

Aspectos como el tamaño o la concentración del control, la información proporcionada por el fabricante, la variedad de referencias ofrecidas, o la ausencia de condiciones especiales de transporte por su presentación liofilizada hacen que la línea de controles de PCR de Vircell sea altamente competitiva en el mercado. Debido a la naturaleza de este tipo de producto y la variabilidad a la que está sujeta su utilización (grado de experiencia del usuario, instrumentos, etc.), resulta muy difícil determinar el número de tests que se pueden realizar con un control de PCR de Vircell. Por consiguiente, la comparación entre precios por test debería de tener en cuenta las particularidades de cada protocolo y de cada usuario. Por ejemplo, algunos fabricantes ofrecen controles de PCR no cuantificados con un volumen de 100 µl en una concentración final de 50 ng/µl. Esta es la misma relación de volumen-concentración que ofrece Vircell en sus controles de PCR no cuantificados. Sin embargo, el precio para el usuario final es prácticamente el doble que el de Vircell. Asimismo, los controles de PCR no liofilizados requieren hielo seco para su transporte, lo cual incrementa mucho el coste del mismo. Todos los controles de PCR de Vircell se presentan en viales liofilizados.

Los controles de PCR que actualmente están en nuestro catálogo no son encapsulados, sino que contienen el material genético completo y purificado del microorganismo listo para su utilización en reacciones de amplificación.

El uso de los controles de PCR de Vircell evita los principales retos que afrontan los laboratorios que usan sus propios controles internos: - Cantidad disponible limitada - Dificultad de obtener muestras positivas en parámetros esotéricos o menos frecuentes - Resultados no estandarizados; inconsistencia entre lotes - Controles no purificados- presencia de material genetico humano o de otro microorganismo - Riesgo asociado a trabajar con agentes infecciosos - Menor estabilidad El uso de controles de PCR comerciales evita estas dificultadoes y proporciona ventajas en términos de facilidad de uso, capacidad de almacenamiento a largo plazo, estandarización, calidad y consistencia. Además, los laboratorios de algunos países están emplazados a usar controles comerciales por grupos de acreditación de calidad.

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