MOSTRAR TODO | OCULTAR TODO

1. ¿Qué tipo de clientes pueden usar esta nueva línea de productos?

Speed-oligo® pretende acercar las técnicas de Biología Molecular a los laboratorios de diagnóstico de enfermedades infecciosas mediante una técnica muy sencilla. Speed-oligo combina todas las ventajas de la Biología Molecular en un test rápido.

Cualquier laboratorio, con un equipamiento mínimo, puede introducir la técnica de PCR con una lectura visual. Los laboratorios que ya utilizan esta técnica con "métodos caseros" también pueden beneficiarse de la alta reproducibilidad, sensibilidad y especificidad que aporta el kit comercial de Speed-oligo®, sin olvidar las ventajas que proporciona un revelado por cromatografía.

Incluso clientes que estén utilizando qPCR pueden estar interesados en Speed-oligo®. En los parámetros "exóticos" que ofrece Vircell, el pequeño número de determinaciones hace más interesante Speed-oligo® que qPCR en términos de coste y caducidad de los equipos.

2. ¿Cuál es el equipamiento necesario para llevar a cabo la técnica de Speed-oligo®?

Con sólo un termociclador (convencional o rápido) y un termobloque es posible realizar la técnica de Speed-oligo®. Estos instrumentos son muy habituales en los laboratorios de Biología Molecular y no es necesario que se utilicen en exclusiva para esta técnica.

3. ¿Qué tipo de muestras se usan en Speed-oligo®?

Como cualquier otra técnica de PCR, la técnica de Speed-oligo® se lleva a cabo con ácido nucleico. El tipo de muestra de la que se extrae el ácido nucleico será diferente para cada referencia de Speed-oligo®. Para algunos de los kits se utilizan muestras respiratorias (Bacterial pneumonia combi, Chlamydophila pneumoniae, Legionella pneumophila o Mycoplasma pneumoniae) mientras que en otros kits se utiliza líquido cefalorraquídeo (Bacterial meningitis), muestras vaginales o rectovaginales (Group B streptococcus) o cultivos (Mycobacteria).

4. Para realizar la técnica de Speed-oligo® es necesario extraer el ácido nucleico de las muestras. ¿Se incluyen en los equipos reactivos para llevar a cabo la extración de las muestras?

Con respecto a la extracción de las muestras, Vircell ofrece reactivos para llevarla a cabo en las determinaciones de Estreptococo grupo B y Micobacterias. En estas referencias se incluye el reactivo VIRCELL SAMPLE SOLUTION que, calentándolo junto con la muestra a 95ºC, permite obtener ADN de calidad para amplificar con PCR. Sin embargo, no es posible utilizar este método de extracción con otras referencias de Speed-oligo® ya que el líquido cefalorraquídeo y las muestras respiratorias contienen gran cantidad de inhibidores que deben ser eliminados con un kit de extracción específico. Para estos casos, cualquier kit comercial, manual o automático, puede ser usado (Qiagen, Roche, etc.)

5. ¿La extracción de la muestra puede llevarse a cabo con un kit clásico de extracción?

Speed-oligo® ha sido probado con diferentes kits de extracción: High pure PCR template preparation kit (Roche), QIAamp DNA blood mini kit (Qiagen) o NucleoSpin tissue (Macherey-Nagel). Sin embargo, se pueden utilizar otros equipos comerciales.

En cualquier caso, hay que tener en cuenta que las referencias para la detección de Estreptococco grupo B y Micobacterias incluyen el reactivo VIRCELL SAMPLE SOLUTION para la extracción del ADN.

6. En algunos países, los laboratorios de Biología Molecular son muy sensibles a los precios ¿cuál es el precio de mercado de Speed-oligo®?

Teniendo en cuenta el canal de distribución necesario en este tipo de productos, Vircell ha fijado el precio objetivo de Speed-oligo® en 15 € por determinación. Aún tratándose de un producto avanzado tecnológicamente, la política de precios de Speed-oligo® se mantiene fiel a su posicionamiento como técnica de Biología Molecular asequible para cualquier laboratorio. En el análisis de precios previo al lanzamiento en el mercado, Speed-oligo® tiene un precio de 2 a 4 veces inferior a la qPCR y otras técnicas similares en el mercado y un poco superior a la PCR convencional, pues ofrece las ventajas de reproducibilidad de un kit comercial cerrado y de gran sencillez.

7. Este método es fácil de llevar a cabo y los resultados se ven muy claros, pero para algunos clientes la contaminación puede ser un inconveniente. ¿Qué posibilidad de contaminación puede haber con el uso de Speed-oligo®?

El PCR-mix incluido en el equipo está preparado para su uso y contiene todos los componentes necesarios para la reacción, incluso la Taq polimerasa. De esta forma, la manipulación y pipeteo son mínimos, reduciendo drásticamente el riesgo de contaminación. Un PCR-mix preparado para su uso, en varios viales (solo es necesario resuspender y alicuotar), es una novedad con respecto a otros kits de PCR o qPCR.

Cualquier técnica de PCR, incluso qPCR, puede tener algún riesgo de contaminación proveniente de controles o muestras. Siguiendo estrictamente las normas básicas de trabajo en un laboratorio de estas características no debe haber problema de contaminación.

En un laboratorio de PCR normal debe haber, al menos, un área de preamplificación donde se prepare la mezcla de reacción en una cabina de flujo laminar y un área de posamplificación donde se manipulen las muestras y se revelen los resultados. Siguiendo estas recomendaciones no debe haber ningún problema de contaminación con Speed-oligo®. Hasta el momento, el Departamento de Atención al cliente no ha recibido ninguna incidencia de este tipo.

8. ¿Puedo hacer Speed-oligo® en mi laboratorio habitual?

Nuestra recomendación es llevar a cabo esta técnica en un laboratorio de Biología Molecular con áreas de pre y posamplificación bien diferenciadas.

En nuestro compromiso de excelencia en el servicio al cliente, Vircell incluye en este documento una guía práctica para el montaje de un laboratorio de PCR según estándares internacionales.

9. Tras el paso final de desnaturalización de la PCR y antes de la hibridación de las tiras ¿es imprescindible poner las muestras en hielo?

Speed-oligo® es una técnica muy sencilla, sin embargo el protocolo de ensayo tiene algunos puntos críticos que es necesario llevar a cabo estrictamente como se indica en las instrucciones de uso:

• Es importante que no transcurra más de 1 minuto entre la desnaturalización y la detección en la tira.
• Si el producto de PCR no se añade a los tubos de 1,5 ml inmediatamente después del paso de desnaturalización final del programa de PCR, será necesario repetir una vez más dicho paso (95ºC durante 1 minuto).
• El termobloque se debe precalentar a 55ºC y la solución de hibridación se debe incubar durante dos minutos a esta temperatura.
• Tras el paso de desnaturalización final del programa de PCR, las muestras deben trasladarse al termobloque usando un gradilla isofreeze a 4ºC o una gradilla normal sobre hielo picado, pero nunca en una gradilla a temperatura ambiente. Otra alternativa es pipetear la muestra sin enfriarla justo después de la desnaturalización a 95ºC e introducir inmediatamente la tira. Para la detección en la tira es necesario que el ADN esté desnaturalizado (hebra sencilla). Si las muestras se dejan a temperatura ambiente, el ADN desnaturalizado se rehibrida consigo mismo y no es posible la hibridación con las sondas de la tira de detección.

10. ¿Cómo y dónde se recomienda almacenar los resultados de Speed-oligo®?

Si el cliente quiere almacenar físicamente las tiras de revelado, se recomienda utilizar las hojas de archivo que se incluyen en el kit y hacerlo en el laboratorio normal de trabajo (área de posamplificación), nunca en el laboratorio de PCR para evitar contaminación. Otra posibilidad es escanear o fotocopiar los resultados y eliminar las tiras de revelado.

11. ¿Es posible usar SPEED-OLIGO® LEGIONELLA PNEUMOPHILA (SP002) con muestras de orina?

Nuestra referencia SP002 sólo ha sido evaluada con muestras respiratorias y no con muestras de orina. Sin embargo, hay que tener en cuenta que las muestras de orina tienen muchas sustancias inhibidoras de la PCR y se necesitaría un sistema de extracción muy bueno. La línea control de amplificación de PCR es un buen control de la presencia de posibles sustancias inhibidoras en la muestra.
Por otra parte, se debe tener en cuenta que nuestra referencia SP002 está dirigida a un oligo presente en todos los serogrupos de Legionella pneumophila  pero no en otras especies de Legionella.

En la literatura científica se pueden encontrar varias publicaciones que hacen mención a la baja sensibilidad de la técnica de PCR en muestras de orina. Esta sensibilidad mejoraría si las muestras son recogidas en los primeros días tras la infección.

12. SPEED-OLIGO® MYCOBACTERIA (SP005) está diseñado para la identificación de Micobacterias en muestras de cultivo, pero ¿puede usarse también con muestras clínicas directamente?

Speed-oligo® únicamente ha sido validado para la identificación en muestras de cultivo. Sabemos que un equipo de identificación de muestras clínicas puede ser una buena oportunidad de mercado y de hecho estamos trabajando en la validación de este protocolo. Hasta el momento hemos obtenido buenos resultados, sin embargo el estudio no se ha concluido aún. En nuestra página web se publicarán los avances a este respecto.

No obstante, el cultivo sigue siendo la técnica de referencia en el laboratorio de micobacterias y la identificación de cultivos positivos sigue siendo un reto, ya que los métodos existentes son lentos y requieren de mucha tecnología. Speed-oligo, por su simplicidad y rapidez, es un complemento perfecto al cultivo de micobacterias ya que permite discriminar entre MTB y MOTT e identificar las MOTT en la misma tira.

13. En el caso de Speed-oligo® para la identificación de Micobacterias, ¿qué sensibilidad tiene el equipo? ¿Hay alguna publicación disponible?

Como se refleja en las instrucciones de uso que acompañan al producto, la sensibilidad de este producto es del 98% (100% en MTB) con un 100% de especificidad. En la 19ª edición de ECCMID (Congreso  Europeo de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas) que tuvo lugar en Helsinki se presentó el siguiente trabajo: Evaluation of an oligochromatographic test for identification of mycobacteria most frequently isolated in human from liquid and solid culture media (Martínez- Lirola, M.J. et al). Esta publicación está disponible en la sección de Bibliografía de nuestra página web y se anexa a este documento.

14. Speed-oligo® frente a secuenciación.

Speed-oligo® no permite una identificación tan exhaustiva como hace la secuenciación. Sin embargo, la ventaja que puede aportar se basa en la relación coste-beneficio.

15. ¿Qué condiciones de transporte requieren los equipos de Speed-oligo®? ¿Se necesita hielo seco para el transporte?

Speed-oligo® no requiere condiciones especiales de transporte. Este producto incluye el control positivo y el PCR-mix liofilizado por lo que el envío puede hacerse a temperatura ambiente. El almacenamiento debe ser refrigerado a una temperatura de entre 2 y 8ºC.

16. ¿Cuál es la caducidad de los equipos de Speed-oligo®?

La caducidad de los equipos Speed-oligo® es de 12 meses desde la fecha de fabricación.

17. En el caso de SPEED-OLIGO® NOVEL INFLUENZA A H1N1 (Ref. SP015), ¿qué pasos previos hay que realizar? ¿Se incluyen todos los reactivos en el kit?

Speed-oligo® incluye los reactivos necesarios para la reacción de PCR y la detección mediante strip. Previo al uso de Speed-oligo® para el diagnóstico de nH1N1, el cliente debe hacer uso de un kit de extracción de ARN y de un kit de reversotranscripción. En las instrucciones que acompañan al producto recomendamos los siguientes kits comerciales aunque otros productos similares pueden utilizarse: QIAamp viral RNA (QIAGEN) para la extracción de ARN e iScript cDNA Synthesis kit (Biorad) o AffinityScript Multiple temperature Reverse Transcriptase (Stratagene) para la retrotranscripción.

18. ¿Existen estudios que avalen el funcionamiento de SPEED-OLIGO® NOVEL INFLUENZA A H1N1 (Ref. SP015)?

En nuestra página web, publicamos un estudio de prestaciones de 253 muestras realizado en colaboración con el Hospital Universitario Virgen de las Nieves de Granada donde se refleja una sensibilidad del 97,5% y una especificidad del 100%. Si necesita más información no dude en contactar con nuestro Departamento de Atención al cliente en customerservice@vircell.com.